Фазовый контраст со светлопольным конденсором
Rolf Vossen
Введение
Обычно для фазового контраста требуется специальный фазово-контрастный конденсор. Такие конденсоры обычно довольно дороги и легко могут стоить 100-200 евро б/у. Если у вас есть микроскоп с 1 или более фазово-контрастными объективами, но нет фазово-контрастного конденсора, есть возможность получить эффект фазового контраста с помощью обычного конденсора светлого поля.
Другая возможность - использовать предметное стекло микроскопа, на которое наклеена круглая черная наклейка. Лучше всего наклеить черную наклейку с обеих сторон предметного стекла. Оптимальный диаметр черной наклейки может отличаться для каждого типа микроскопа, например, для Zeiss Standard я использовал наклейки диаметром 12 мм, а для Zeiss Standard junior - диаметром 19 мм. Эти круглые наклейки можно приобрести в магазине канцтоваров. Отклонение на 1-2 мм от этого диаметра, вероятно, не будет иметь большого значения, что будет компенсировано другой настройкой высоты конденсора.
Чтобы проверить фазово-контрастный эффект, лучше всего использовать в качестве материала эпителиальные клетки щеки. Для этого зубочисткой проводят по одной или обеим щекам, а затем наносят материал в небольшой капле воды. Ниже приведены некоторые эксперименты с использованием различных типов микроскопов.
Zeiss Standard
Для Zeiss-Standard со складным конденсором NA 0,9 используется предметное стекло, покрытое черными круглыми наклейками диаметром 12 мм. Теперь предметное стекло можно разместить на световом выходе или в держателе фильтров. На светодиоде, однако, проще и доступнее для центрирования. Когда предметное стекло помещено на светодиод, процедура для объективов с фазовым кольцом Ph2 выглядит следующим образом:
- Установите микроскоп в соответствии с освещением по Кёлеру так, чтобы все было отцентрировано
- Поместите предметное стекло на светодиод
- Полностью откройте диафрагму и переместите конденсор в верхнее положение
- Переднюю линзу конденсора 0,9 откиньте в сторону.
- С помощью фазового телескопа просмотрите исходную ситуацию
- Расположите предметное стекло так, чтобы черный круг был в центре
- Опустите конденсор так, чтобы в фазовом кольце объектива не было видно света, при этом черный круг предметного стекла может быть постцентрирован.
- Закрывайте диафрагму конденсора до тех пор, пока не перестанет быть виден свет за пределами фазового кольца объектива.
- Теперь видно только фазовое кольцо объектива, и фазовый контраст установлен.
Для объективов с фазовым кольцом Ph3 передняя линза должна быть откинута назад, а объективная линза установлена на держатель фильтра.
Zeiss Standard Junior
Для Zeiss Standard Junior со складным конденсором 0,9 необходимо использовать круглые наклейки большего диаметра, здесь я использовал наклейки диаметром 19 мм. Опять же, предметное стекло можно поместить либо в держатель фильтра, либо на лампу. Если у микроскопа есть зеркало или лампа, на которые нельзя положить предметное стекло, то держатель фильтра - единственный вариант. Круглое стекло диаметром 32 мм с наклейками диаметром 18 мм также можно поместить в держатель фильтра. Недостатком этого способа является меньшая свобода центрирования черной наклейки. С предметным стеклом это получается лучше. Для получения фазового контраста можно выполнить ту же процедуру, что и для Zeiss Standard.
Olympus 37 mm объективы
Микроскопы Olympus с объективами 37 мм, такие как Olympus моделей E, FH или GB, например, обычно оснащены конденсором NA 1,25. С таким конденсором верхняя линза может быть отключена, а для получения эффекта фазового контраста при использовании предметного стекла это необходимо. Для объективов с фазовым контрастом 40x я использовал круглые наклейки диаметром 12 мм. Для 100-кратных фазово-контрастных линз нужны более крупные наклейки, я использовал 19 мм. Предметное стекло может быть установлено в трех местах: на конденсоре (без верхней линзы), на держателе фильтра или на лампе. Для 10-кратных фазово-контрастных объективов требуются наклейки размером менее 12 мм. У меня не было возможности протестировать эти объективы. Но для фазового контраста больше всего подходят объективы 40 и 100.
Заключение
Используя предметное стекло и черные круглые наклейки, можно легко добиться фазово-контрастного освещения, не прибегая к помощи специального фазово-контрастного конденсора.