Приготовление гистологических препаратов
Эта статья начинает небольшой цикл статей про гистологию и гистологические препараты.
Сегодня мы рассмотрим процесс приготовления препарата только от взятия до подготовки к окрашиванию.
Взятие и фиксация материала
Взятие производится двумя способами: первый — биопсия (прижизненное изъятие тканей), второй — аутопсия (посмертное изъятие тканей).
- Из соответствующего органа вырезают небольшие кусочки (0,5 x 1 x 1 см) и погружают их в фиксатор (формалин, метанол и т. д.), обычно на 24 ч.
(Фиксация производится для предупреждения процессов аутолиза (самопереваривания) тканей. Это достигается путём денатурации белков-ферментов.)
2. После фиксации образцы промывают проточной водой в течение нескольких часов.
Обезвоживание и уплотнение материала
Затем образцы уплотняют, чтобы в последующем их можно было резать на микротоме. Часто в качестве уплотнителя используют парафин или целлоидин.
- Предварительно образцы обезвоживают (иначе гидрофобный уплотнитель не сможет проникнуть в ткань). Для этого их “проводят” по спиртам:
70% , 80% , 96% , 100% этанолу — по 24 часа в каждом спирте. - Т. к. парафин нерастворим и в этаноле, образцы выдерживают потом в смеси этанол-ксилол и в чистом ксилоле.
Заливка в парафин
3. Образцы помещают в смесь ксилол-парафин и затем в жидкий парафин на 1-2 ч при 52-56 градусах по Цельсию.
4. Дают парафину затвердеть.
5. Вырезают из него блок с заключённым образцом и закрепляют на деревянном кубике (в современных лаборатория конечно же не используют никаких деревянных кубиков — это прошлый век; процесс заливки в парафин и одновременного закрепления на специальной гисто-кассете почти полностью автоматизирован).
6. Затем делают срезы при помощи специального прибора — микротома (также существуют замораживающие микротомы, их используют тогда, когда есть необходимость сохранения липидов — в таком случае все вышеперечисленные манипуляции пропускаются).
7. Помещают срезы на тёплую воду, чтобы они расплавились, и в расправленном виде аккуратно помещают на стекло.
8. Перед окраской из парафиновых срезов обязательно удаляют парафин (производят так называемую депарафинизацию) посредством полоскания препаратов в ксилоле.
А про окрашивание будет подробно рассказано в следующем посте!