Методы стерилизации растительных эксплантов

После приготовления питательной среды необходимо приступить к высадке растений на неё. А чтобы это сделать, нужно простерилизовать посадочный материал. Сегодняшняя статья как раз расскажет вам, дорогие читатели, об этом.

Растительные объекты перед стерилизацией тщательно отмывают проточной водой, иногда с моющими средствами, очищают от излишних тканей. С корнеплодов и корней снимают кожуру, с побегов – кору, с почек – кроющие чешуйки.

Растительные экспланты обычно стерилизуют растворами веществ, содержащими активный хлор (гипохлоритом кальция или натрия, сулемой (двухлористая ртуть), хлорамином). Также иногда используют перекись водорода, спирт, нитрат серебра, хлоргексидин и др.

Этиловый спирт часто применяют для предварительной стерилизации, протирая им поверхность материала или погружая материал на несколько секунд в 70% раствор спирта. Иногда такой стерилизации достаточно: её используют при работе с плодами, семенами, побегами и завязями.

В случаях, когда стерилизации спиртом не хватает, прибегают к стерилизации раствором гипохлорита кальция (хлорная известь). Она используется в виде 5-7% растворов для обработки почек, завязей, цветков, семян, побегов в течение 5-10 минут.

Гипохлорит натрия используется в виде 0,5-5% раствора для обработки любых эксплантов в течение 1-20 минут. Это вещество является клеточным ядом, поэтому время стерилизации и концентрацию подбирают экспериментально. Например: для изолированных зародышей используют 2-3% раствор в течение 10-15 минут, а для сухих семян 3-5% раствор в течение 1 часа. После обработки раствор гипохлорита натрия сливают, а затем 3 раза промывают стерильной дистиллированной водой.

Хлорамин применяют в концентрации 1-6%. Пыльники и молодые зародыши обрабатывают в течение 1-3 минут, сухие семена – 30-60 минут, затем промывают стерильной дистиллированной водой 3 раза.

Сулема – токсичное вещество и требует особой тщательности как при хранении, так и при подборе концентрации для отдельных объектов. Для стерилизации зародышей используют 0,1% раствор в течение 1-3 минут, для корне- и клубнеплодов – до 10-20 минут.

Растворы, содержащие активный хлор, используются 1 раз и готовят их непосредственно перед работой.

Сам процесс стерилизации можно разделить на три этапа:

- Предварительная стерилизация исходного растительного материала. Условия обработки варьируют в зависимости от объекта. Хранящиеся органы промывают водопроводной водой, фрагменты стебля, корня или листья также промывают проточной водопроводной водой и помещают в спирт. Предварительная стерилизация семян – более длительная процедура, зависящая от степени их загрязнённости.

- Собственно стерилизация. Предварительно простерилизованные ткани и органы помещают в стерилизующий раствор. Необходимое условие процесса стерилизации – это обеспечение достаточной степени чистоты объекта и сохранность его жизнеспособности.

- Постстерилизация. Отмывание объекта от стерилизующего раствора порциями стерильной воды.

Все вышеописанные процедуры необходимо проводить в стерильных ламинар-боксах с соблюдением условий асептики.